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单克隆抗体制备成功的要素之一:抗原要求及分类

提供者:上海古朵生物科技有限公司   发布时间:2020/4/20  阅读次数:132次   进入该公司展台

抗原又称作免疫原,是指能引起抗体生成的物质,能够刺激机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞。抗原具有免疫原性,能够引起连续的免疫反应。

原则上任何可以诱发免疫反应的物质都可以做抗原,包括天然抗原和人工合成抗原,如蛋白质、多糖、脂类、核酸等。但是一个免疫原强的抗体应满足以下的要求:

(1) 分子量足够大。抗原决定簇一般有6-8个氨基酸残基构成,平均5-10kD才会有一个抗原决定簇,因此分子量太小的多肽或蛋白难以形成一个抗原决定簇。

(2) 外源性要强。机体可以对自身物质形成免疫耐受,因此抗原和体内物质完全一样或者相似就难以引起免疫应答,自然也就难以产生抗体了。

(3) 结构尽量复杂。越是结构简单的物质,免疫原性越差。简单重复的物质一般不具有免疫原性。

(4) 可降解性好。

抗原按照其来源一般可分为:

1. 纯化的天然蛋白质

天然蛋白经过修饰,具有线性表位和结构表达,结构相对来说,比较复杂,属于比较理想的抗原。但由于天然蛋白纯化要求比较高,难以获得高纯度的天然蛋白,会影响免疫和抗体纯化。因此一般只选择在机体内表达量比较高的蛋白作为抗原。

2. 纯化的重组蛋白

重组蛋白纯化技术比较多,容易获得高纯度的蛋白,并且种类、结构容易检测。选择重组蛋白要清楚这些蛋白是否带有标签,因为为了方便纯化重组蛋白,一般会添加一些标签,比如GST、His、Myc、Fc、Flag等。这些带标签的抗原在免疫动物体内户产品带有标签的抗体,需要在抗体纯化过程中将这些标签去掉。

3. 人工合成的多肽

合成的多肽可以在不同的区域作为抗原进行免疫。

4. 小分子物质

分子量大小一般不会超过1000 Da,但小于300 Da就难以获得高亲和力的抗体,因此常会链接载体后才会进行动物免疫。

5. 组织、全细胞或细胞组分

有时由于抗原靶点不清楚,会选择组织、全细胞或细胞组分作为抗原进行动物免疫。如果以组织作为抗原,则需要切除新鲜的组织,用生理盐水洗干净,然后用滤网和研杵将其分离成单个细胞。

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